La photosynthèse : Les pigments photosynthétiques – La réaction de Hill
Publié le 09/12/2011
Extrait du document
1) Diversité des pigments photosynthétiques
1.1.) But de la manipulation
Le but de la manipulation est de séparer les pigments impliqués dans la photosynthèse par chromatographie sur couche mince, puis d’en déterminer le spectre d’absorption. On estimera également la concentration en chlorophylles du matériel végétal frais.
1.2.) Hypothèses
Les pigments sont indispensables pour capter l’énergie lumineuse et la convertir en énergie chimique. Ces derniers sont capables de convertir un quanta lumineux en énergie d’excitation d’électron, point de départ de synthèses chimiques. Chez les végétaux supérieurs, on s’attend à retrouver plusieurs types de pigments localisé dans les chloroplastes. Ceci permet de capter l’énergie lumineuse sur une bande de longueur d’onde assez large (voir spectre électromagnétique).
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LARCY Corentin PLOMTEUX Julien 21/02/2009
Purification de l’extrait
Les 9 ml d’extrait acétonique brut sont extrait dans une ampoule à décanté à l’aide de 5 ml d’éther de pétrole
et d’eau.
Les pigments vont migrer dans la phase con tenant l’éther de pétrole car la constante de séparation
des pigments est plus élevée pour ce solvant que pour l’acétone ou l’eau.
Séparation des pigments
Sur deux plaques de silice, on effectue 3 spots (sur chaque) de l’extrait acétonique brut à 1 cm du bord
inférieur.
Par facilité, on réalise ces spots à l’aide d’un microcapillaire en verre et ceci une trentaine de fois
afin d’avoir un grand nombre de pigment.
Les plaques de silice sont placées dans une cuve contenant 10 ml de solution de développemen t (éther de
pétrole : acétone => 70 : 30) pendant 15 min.
Cette cuve est refermée à l’aide de parafilm et mise à l’obscurité
afin de ne pas détruire les pigments avec la lumière.
Le solvant va monter par capillarité en entrainant avec
lui les pigments sur la plaque de silice.
Les pigments ayants le plus d’affinité avec le solvant seront situé tout
en haut de la plaque de silice et inversement.
Distante totale parcourue par le solvant = 6,8 cm
R.F.
B -carotène = 6,8 / 6,8 = 1
R.F.
Phéophytine = 4,56 / 6,8 = 0,67
R.F.
Chlorophylle a = 3,56 / 6,8 = 0,52
R.F.
Chlorophylle b = 3,12 / 6,8 = 0,46
R.F.
Lutéine = 3 / 6,8 = 0,45
R.F.
Violaxanthine = 2,43 / 6,8 = 0,36
R.F.
Neoxanthine = 1,40 / 6,8 = 0,21
Estimation de la teneur en chlorop hylle de l’extrait acétonique brut
Les 1 ml d’extrait acétonique brut préparé précédemment sont mis dans une cuvette à spectrophotométrie.
On y ajoute 2 ml d’acétone afin de diluer la solution car la spectrométrie dans le visible est plus efficace en
milie u très dilué.
On mesure ensuite l’absorbance à 663 nm et à 645 nm avec comme blanco l’acétone.
A
663 nm = 0, 38
A
645 nm = 0,27
Xanthophylles.
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