Étude sur le PTC
Publié le 18/04/2015
Extrait du document
«
la dominance de ce caractère est incomplète.
Nous pensons donc que l’individu qui possède deux
allèles « goûteur » sera un goûteur fort, celui qui possède deux allèles « non-gouteur » ne goûtera
aucunement le PTC et celui qui possède les deux allèles différents sera un goûteur faible.
Il y a
alors plus de deux variantes observables de ce gène.
En effet, nous supposons qu’un goûteur fort
sera de génotype GG , un goûteur faible sera de génotype Gg et un non-goûteur sera de génotype
gg .
Pour tester notre hypothèse, nous allons d’abord déterminer notre phénotype en goûtant un
papier témoin et un autre imprégné de PTC.
Ensuite, nous désignerons deux membres de notre
équipe qui boiront une solution d’eau saline afin d’extraire un échantillon de leur ADN.
La
prochaine étape consiste à amplifier le gène à étudier puis à séparer les deux brins composant la
séquence d’ADN (dénaturation) et introduire les amorces qui s’attachent à la séquence
complémentaire du brin d’ADN, maintenant monocaténaire et la délimitent (hybridation).
Ensuite
l’enzyme (taq polymérase), destinée à la synthèse de l’ADN, vient polymériser les amorces à
l’aide de nucléotides triphosphates soient, l’adénosine, la cytosine, la guanosine et la thymine
(élongation) 2
.
Cette étape se répétera plusieurs fois afin d’avoir une séquence d’ADN amplifiée
que nous appellerons Amplicon.
Nous amplifions la séquence d’ADN choisie pour la rendre
visible, avec coloration, à l’œil nu sur le gel.
Ultérieurement, nous procèderons à la digestion de
l’ADN qui consiste à insérer dans l’échantillon d’ADN une enzyme de restriction ( HaeIII ).
Une
enzyme de restriction (aussi appelée endonucléase) est une protéine qui coupe une séquence
d’ADN à un endroit précis selon les bases azotées qui le composent.
L’enzyme HaeIII plus
spécifiquement, reconnaîtra une séquence spécifique de l’Amplicon qui compose son site de
restriction et coupera l’Amplicon à cet endroit 3
.
L’électrophorèse sur gel consiste à placer notre
d’Amplicon digéré et un non digéré dans un gel.
Sous l’influence d’un courant électrique de
charge positive, ces échantillons de charge négative se déplaceront à l’intérieur du gel.
Les
séquences les plus courtes se déplaceront plus loin dans le gel et les plus longues qui iront moins
loin.
Ainsi, un Amplicon qui a été coupé par l’endonucléase (allèle goûteur) se déplacera plus
loin.
L’Amplicon non coupé (allèle non-goûteur) se déplacera moins loin.
On comprend donc
22 ENS LYON.
2001.
La PCR ? Mise à jour le 16 juin 2001.
En ligne URL : http://www.ens-
lyon.fr/RELIE/PCR/principe/anim/presentation.htm consulté le 24 novembre 2014.
33 NEW ENGLAND BIOLABS INC.
2014.
HaeIII .
Mise à jour en 2014.
En ligne URL :
https://www.neb.com/products/r0108- haeiii consulté le24 novembre 2014.
2.
»
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