Questions-réponses ED n° et 2 de biologie cellulai re PACES - 2010/2011 1 Introduction et Matrice extracellulaire - Dans quelles situations utiliser l'une ou l'autre des différentes techniques d'isolement des cellules (centrifugation, différence d'adhérence, FACS.

« La liaison aldimine implique un atome d’azote (produit de la condensation d’une deltahydroxylysine avec un epsilon-lysylal), alors que la liaison aldo l est le produit de la condensation d’un epsilon-ly sylal et d’un delta hydroxy epsilon lysylal - Comment les leucocytes interagissent avec les sél ectines ? Les sélectines exprimées à la surface des cellules endothéliales sont impliquées dans le rolling et l’immobilisation des leucocytes circulants, via la reconnaissance de motifs glucidiques présents à la surface de ces leucocytes.

L’interaction avec les s électines est précoce et transitoire Le franchissement de l’endothélium (diapédèse) cons titue l’étape suivante impliquant d’autres acteurs moléculaires.

Architecture membranaire - Quelles sont les conséquences sur la fluidité mem branaire de la présence de doubles liaison au niveau des chaines carbonées des acides gras ? De façon très simpliste, les acides gras insaturés (à double liaison) "prennent plus de place" car leur squelette carbonné est moins linéaire.

Les phosphol ipides à acides gras insaturés peuvent donc moins bien "se ranger" dans une bicouche lipidique, donc c'est plus fluide.

Au contraire, quand les acides gras sont saturés, ils peuvent bien se range r, les phospholipides sont bien "tassés" et les bicouches lipidiques sont donc plus rigides.

- Les microsomes existent-ils physiologiquement dan s le corps humain ou sont-ils seulement obtenus après homogénéisation cellulaire et ultrace ntrifugation ? Les microsomes ne sont pas des organites cellulaire s.

Ils sont obtenus après homogénéisation des cellules et sont formés de membranes venant essenti ellement de la membrane plasmique, du RE et du Golgi.

- Y-a-t-il encore du milieu intracellulaire et extr acellulaire lorsque les microsomes se reforment après lyse hypotonique ? Non, au moment de la lyse cellulaire le cytoplasme se déverse dans la solution contenant les cellules.

Quand les microsomes se referment, ils contiennent donc une solution résultant du mélange du cytosol et du milieu extracellulaire.

- Puisque les microsomes ne contiennent plus de cyt osol, est-ce que des ponts disulfures peuvent se former du côté du feuillet P ? Peut-être, à condition que le feuillet P soit en co ntact d’un milieu « non réducteur »....

En tout cas les ponts disulfure qui se sont formés au niveau du RE du côté du feuillet E restent ! Les ponts disulfure sont maintenus tels qu'ils étai ent initialement dans la cellule vivante intacte.

Concernant leur formation dans la cellule intacte, ce point sera étudié au second semestre.

Les ponts disulfure s’établissent dans le lumen du RE au fur et à mesure de la translocation de la protéine depuis le cytoplasme (lieu de la synthèse protéique ) et donc ils sont établis un peu "n'importe où".

Une fois que ces ponts sont faits il est difficile de l es rompre, il faut mettre des réducteurs puissants.

Cependant, dans le lumen du RE il y a une enzyme, l a protéine disulfure isomérase (PDI) qui est capable de remodeler les ponts disulfure pour les r ompre et les reformer entre des cystéines donnant une conformation dans l'espace correcte de la proté ine.

Quand les protéines trafiquent ensuite jusqu'à la membrane plasmique par transport vésiculaire, le s ponts disulfure ne sont plus modifiés.

C’est donc pour cela que dans la membrane plasmique les ponts disulfure des protéines se trouvent du côté du milieu extracellulaire.

- Pourquoi le domaine transmembranaire d’une protéi ne membranaire intégrale est souvent sous forme d’hélice alpha ? C'est parce que c'est la structure protéique second aire la plus énergétiquement favorable.

Les acides aminés sont pour beaucoup d'entre eux à chaînes lat érales non polaires qui sont vers l'extérieur de l'hélice et qui protègent l'axe de l'hélice de l'en vironnement lipidique hydrophobe de la membrane.

- Pourquoi n'extrait-on pas les protéines périphéri ques avec le SDS ? On extrait aussi les protéines périphériques si on met du SDS sur des membranes biologiques.

L'énoncé de l’ED n°1 aurait du être formulé de la f açon suivante : "On travaille sur 3 protéines qu'on peut extraire de membranes biologiques avec du SDS.

Ces protéines ne sont pas extraites quand on applique une solution de force ionique élevée.". »